《2025年资源库高中生物人教版》

2.间接计数法（稀释涂布平板法）

答案： （1）原理：当样品稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功统计菌落数目的关键。
（2）方法：①将待测样品配制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开。②再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内；或是将一定量的稀释液，与灭菌后冷却至45℃左右的琼脂培养基混合，倒入无菌培养皿中，摇匀、静置待凝。③经过培养后，就由单个微生物生长繁殖形成菌落，这样的一个菌落就代表着一个微生物个体。统计培养基中出现的菌落数，即可推算出检测样品中的活菌数。
（3）计算公式：每克样品中的菌株数=(C÷V)×M，其中C表示某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V表示涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M表示稀释倍数。

3.其他统计菌落数目的方法

答案： 滤膜法：以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例，将已知体积的水过滤后，将滤膜放于伊红—亚甲蓝琼脂培养基上培养，在该培养基上，大肠杆菌菌落呈现深紫色，并有金属光泽，可根据菌落上符合该特征的菌落数目，计算出样品中大肠杆菌的数量。

1.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验

答案： （1）分离原理：土壤中某些细菌之所以能分解尿素，是由于它能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起催化作用。以尿素为唯一氮源的选择培养基能促进分解尿素的细菌的生长和繁殖，并抑制或阻止其他微生物的生长，从而将目的菌分离。
（2）统计菌落数目：统计样品中的活菌数一般用稀释涂布平板法。
（3）实验步骤：土壤取样（酸碱度接近中性的潮湿土壤，从距地表3-8cm的土壤层取样）→样品稀释（样品稀释度直接影响平板上生长的菌落数，测定土壤中细菌的数量，选用1×10⁴、1×10⁵、1×10⁶倍稀释的稀释液进行平板培养）→培养与观察（细菌一般在30-37℃下培养1-2d，每隔24h统计一次菌落数，且选取菌落数目稳定时的记录作为结果，仔细观察所分离的菌落，最后以表格的形式将不同菌落的特征（如大小、形状、颜色等）记录下来）。