《2026年理想树图书高考必刷卷42套模拟卷汇编高中生物全一册通用版江苏专版》

23. (13 分)近年来，越来越多的研究表明抑癌基因 p53 与细胞衰老有关，同时有研究发现某因素 M 诱发的视网膜病变与视网膜细胞衰老有关。科研人员欲探究 p53 与视网膜细胞衰老和视网膜病变的关系，用 M 处理小鼠，并对实验小鼠视网膜细胞内与衰老相关的分子进行定量分析，发现与正常小鼠相比，实验小鼠视网膜细胞内 p53(由 p53 基因编码出的蛋白质)、β - 半乳糖苷酶和一些炎性因子表达升高，初步推测小鼠视网膜已表现衰老。回答下列问题：


(1)利用 PCR 技术在体外获取大量的小鼠 p53，并构建基因表达载体。PCR 反应体系中需要含有缓冲液、模板(目的基因)、4 种脱氧核苷酸、引物、酶等，其中引物的作用为。扩增产物常采用法进行鉴定。
(2)将 p53 基因插入图 2 所示大肠杆菌的质粒中保存，其中$LacZ$基因编码产生的β - 半乳糖苷酶可以分解 X - gal 产生蓝色物质，使菌落呈蓝色，否则菌落为白色。
①将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素和 X - gal 的固体培养基上，以筛选出成功导入重组质粒的宿主菌。若只使用限制酶$EcoR$Ⅰ构建重组质粒，导入重组质粒的菌落呈现白色，这些菌落(填“能”或“不一定能”)产生 p53，原因是 (2 分)。
②若使用限制酶 (2 分)将 p53 插入质粒中，则呈色的菌落为符合要求的宿主菌，原因是 (2 分)。
(3)研究发现 FoxO3a 是 p53 的下游信号蛋白，在细胞内过量表达 FoxO3a 可减轻 p53、β - 半乳糖苷酶和一些炎性因子相关指标的表达，改善视网膜细胞衰老。将含 p53 的载体导入视网膜细胞后，细胞内 p53、FoxO3a 的表达水平如图 3 所示，说明 p53 加重 M 诱发的小鼠视网膜细胞衰老的机制为 (2 分)。

答案： 23.（除标注外，每空1分，共13分）
（1）耐高温的DNA聚合 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 琼脂糖凝胶电泳
（2）①不一定能 EcoRⅠ切割目的基因和质粒后两端产生的黏性末端相同，构建的重组质粒可能由目的基因和质粒反向连接而成，目的基因无法正常表达（2分）
②EcoRⅠ、KpnⅠ（2分） 白 重组质粒中LacZ基因被破坏，宿主菌无法合成β-半乳糖苷酶，不能分解X-gal，菌落呈白色，且双酶切可以保证目的基因正向连接（2分）
（3）p53通过促进FoxO3a的降解，增加p53、β-半乳糖苷酶和一些炎性因子相关指标的表达水平，加重M诱发的小鼠视网膜细胞衰老（2分）