《2026年新高考5年真题生物湖南专版》

21. （13分）非洲猪瘟病毒是一种双链DNA病毒，可引起急性猪传染病。基因A编码该病毒的主要结构蛋白A，其在病毒侵入宿主细胞和诱导机体免疫应答过程中发挥重要作用。请回答下列问题：
（1）制备特定抗原
①获取基因A，构建重组质粒(该质粒的部分结构如图所示)。重组质粒的必备元件包括目的基因、限制酶切割位点、标记基因、启动子和终止子、复制原点等；为确定基因A已连接到质粒中且插入方向正确，应选用图中的一对引物P1和P3对待测质粒进行PCR扩增，预期扩增产物的片段大小为782bp。

注：P1、P2和P3表示引物。
②将DNA测序正确的重组质粒转入大肠杆菌构建重组菌。培养重组菌，诱导蛋白A合成。收集重组菌发酵液进行离心，发现上清液中无蛋白A，可能的原因是重组菌没有裂解，蛋白A没有释放出来；蛋白A沉淀；蛋白A被大肠杆菌的蛋白水解酶解；转速过高使蛋白A沉淀（答出两点即可）。
（2）制备抗蛋白A单克隆抗体
用蛋白A对小鼠进行免疫后，将免疫小鼠B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，诱导融合的常用方法有PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法(答出一种即可)。选择培养时，对杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，多次筛选获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。体外培养或利用小鼠大量生产的抗蛋白A单克隆抗体，可用于非洲猪瘟的早期诊断。

答案： 21. 参考答案
(1)①终止子、复制原点 P1和P3 782 ②重组菌没有裂解，蛋白A没有释放出来；（答出两点即可）蛋白A沉淀；蛋白A被大肠杆菌的蛋白水解酶解；转速过高使蛋白A沉淀
(2)PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法（答出一种即可） 抗体检测
命题意图 本题主要考查动物细胞融合、基因工程与PCR的相关知识，意在考查考生的理解能力、获取信息的能力和综合运用能力。
解题思路
(1)①重组质粒的必备元件包括目的基因、限制酶切割位点、标记基因、启动子、终止子和复制原点等。PCR时选用的两种引物的方向应该相反，分析题图，P3是唯一一个与P1和P2方向相反的引物，故必选P3。若选P2和P3进行扩增，无论基因A插入质粒方向是否正确都可以扩增出片段（基因A），不符合要求。P1与质粒一段序列互补配对，P3与基因A的一端互补配对，选P1和P3为引物，扩增时，若基因A未插入质粒，则不能扩增出相应片段；若基因A插入质粒的方向错误（即P1、P3同向），也不能扩增出相应片段，故应选P1和P3对检测质粒进行PCR扩增。预期扩增的片段包括质粒的一段序列（200 bp）和基因A（582 bp），故扩增片段大小为$200\ bp+582\ bp=782\ bp$。②上清液中检测到蛋白A的条件：重组菌将蛋白A正常表达；蛋白A不被重组菌降解；重组菌裂解，将蛋白A释放到细胞外；离心时转速合适，既能将重组菌和大的颗粒沉淀，又不会将蛋白A沉降下来。因此，上清液中无蛋白A的原因可能是重组菌没有裂解，蛋白A没有释放出来；转速过高使蛋白A沉淀；蛋白A被大肠杆菌的蛋白水解酶解。
(2)诱导动物细胞融合的方法有PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。应对经选择培养所得的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选后可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。