《2025年点金训练精讲巧练高中生物选择性必修3人教版》

1.下列有关基因工程中载体的说法，正确的是(D)

A.质粒是一种独立于细菌拟核外的链状DNA分子
B.所有的质粒都可以作为基因工程中的载体
C.质粒载体的复制和表达不遵循中心法则
D.作为载体的质粒常含有抗生素抗性基因

答案： [评价活动]
1.D 解析：质粒是一种独立于细菌拟核外的环状DNA分子，A错误；天然的质粒不能直接作为载体，基因工程中用到的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的，B错误；质粒载体的复制和表达遵循中心法则，C错误；作为载体的质粒常含有抗生素抗性基因，这可以作为标记基因，对重组后的重组DNA进行筛选，D正确。

2.下图是某质粒的结构示意图(a、b、c代表外源基因可能的插入位点)，下表是外源基因插入某位点后含重组质粒的细菌在不同培养基上的生长情况。根据表中提供的细菌的生长情况，推测①②③三种重组细菌的外源基因插入位点，其中正确的一组是(A)



A.①是c;②是b;③是a
B.①是a和b;②是a;③是b
C.①是a和b;②是b;③是a
D.①是c;②是a;③是b

答案： 2.A 解析：细菌①在两种培养基上都能生长，说明抗氨苄青霉素基因和抗四环素基因都没有被破坏，外源基因插入位点是c点；细菌②在含氨苄青霉素的培养基上能生长，在含四环素的培养基上不能生长，说明抗氨苄青霉素基因没有被破坏，抗四环素基因被破坏了，外源基因插入位点是b点；细菌③在含四环素的培养基上能生长，在含氨苄青霉素的培养基上不能生长，说明抗氨苄青霉素基因被破坏了，抗四环素基因没有被破坏，外源基因插入位点是a点，A正确。

3.大多数奶酪的生产需要使用凝乳酶来凝聚固化奶中的蛋白质。传统的凝乳酶制备方法是从未断奶小牛的第四胃的黏膜中提取，此法现已不再使用。现在科学家将编码牛凝乳酶的基因(长度为1.5kb)导入大肠杆菌获得工程菌，再通过工业发酵批量生产凝乳酶。下图为所用载体示意图，下表为限制酶的识别序列及切割位点。请回答下列问题：


(1)构建基因表达载体：为使目的基因与载体正确连接，在扩增目的基因时，应在其一对引物的5'端分别引入Pvit2和EcoRI两种不同限制酶的识别序列。在目的基因和载体连接时，可选用T4 DNA连接酶(填“E.coli DNA连接酶”或“T4DNA连接酶”)。
(2)筛选与鉴定：将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养，随机挑取菌落(分别编号为1、2、3、4)培养并提取质粒。

答案： 3.解析：
(1)据图可知，目的基因应该插入启动子和终止子之间，图中BamHI能破坏标记基因，HindⅡ能破坏启动子，PstI能破坏终止子，KpnI在质粒上不止一个酶切位点，能将终止子切割掉，而Pvit2和EcoRI位于启动子和终止子之间，因此切割目的基因和质粒时用Pvit2和EcoRI，在引物的5'端需要加入的是Pvit2和EcoRI限制酶序列。Pvit2切割后形成的是平末端，EcoRI切割后形成的是黏性末端，E.coli DNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来，而T4 DNA连接酶可用于连接黏性末端和平末端，因此本题中在目的基因和载体连接时，可选用T4 DNA连接酶。
(2)据题意可知，该基因表达载体上含有氨苄青霉素抗性基因，因此可将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养并筛选。
答案：
(1)Pvit2和EcoRI T4 DNA连接酶
(2)氨苄青霉素