《2025年点金训练精讲巧练高中生物选择性必修3人教版》

四、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1. 原理：绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。
2. 步骤
土壤取样：铲去表层土，铲取距地表3~8cm的土壤层。注意取土样的铁铲和纸袋在使用前需要灭菌
样品稀释：测定土壤中细菌的数量，一般选用1×10⁴、1×10⁵和1×10⁶倍稀释的稀释液进行平板培养
取样涂布：涂布器从酒精中取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰上灼烧。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀
培养：30～37℃培养1～2d，同时培养空白培养基，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落
观察、记录并计数：每隔______h统计一次菌落数目，选取______时的记录作为结果，并记录菌落的______
3. 操作提示
基于对土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验操作的理解，判断下列关于实验操作的说法正确的是①②③⑤。
①本实验耗时长，应提前制订好计划，提高效率
②本实验用到的器材比较多，应该对试管和平板做好标记
③取土样的铁铲和取样纸袋使用前都需要灭菌
④为了防止杂菌污染，从酒精中取出的涂布器应该直接在酒精灯火焰上充分燃烧灭菌
⑤过热的涂布器不能直接放在盛有酒精的烧杯中

答案： 1.脲酶 尿素 分解尿素 2.1×10⁴、1×10⁵和1×10⁶ 30～37 1～2 24 菌落数目稳定 特征 3.①②③⑤

1. [教材P18正文]在稀释涂布平板法中，为何需至少涂布3个平板？

答案： 1.提示：作为重复实验，统计时取平均值，以减少偶然因素对实验结果的影响，增强实验结果的说服力。

2. [教材P18正文]采用稀释涂布平板法接种，为什么统计的菌落数目往往比活菌的实际数目低？

答案： 2.提示：因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

3. [教材P19“探究·实践”]如何借助生物化学的方法来鉴定所分离的尿素分解菌？

答案： 3.提示：使用以尿素为唯一氮源的培养基，尿素分解菌合成的脲酶可以将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，可确定该细菌能够分解尿素。

概念辨析
1. 利用稀释涂布平板法统计菌落数目时，统计的菌落数就是活菌的实际数。(×)
2. 统计菌落数目时为保证结果准确，一般选择菌落数目最多的平板进行统计。(×)
3. 利用稀释涂布平板法和平板划线法均可实现细菌的分离和计数。(×)
4. 稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养。(×)
5. 涂布接种时，需将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中，然后取出并用酒精灯外焰灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后再使用。(√)
6. 一般选择菌落数大于300的平板进行计数。(×)
7. 显微镜直接计数法统计的都是稀释液中的活菌。(×)

答案： 1.× 2.× 3.× 4.× 5.√ 6.× 7.×