《2025年赢在微点轻松课堂微讲小本高中生物选择性必修3》

一、基因工程的基本操作程序
_______的筛选与获取→_______的构建→将目的基因导入_______→目的基因的_______。

答案： 目的基因 基因表达载体 受体细胞 检测与鉴定

二、目的基因的筛选与获取
1. 目的基因：在基因工程的设计和操作中，用于改变_______或获得_______等的基因就是目的基因。主要是指_______的基因，如生物抗逆性、优良品质、Bt基因等相关基因。
2. 筛选合适的目的基因。
筛选方法：从相关的已知结构和_______的基因中进行筛选。随着测序技术的发展，以及_______(如GenBank)、序列比对工具(如BLAST)等的应用，提供了更多的机会和可能。
3. 利用PCR获取和扩增目的基因。
(1)原理：_______的原理。
(2)DNA复制所需的基本条件。
|参与的组分|在DNA复制中的作用|
|----|----|
|解旋酶(体外用高温代替)|打开_______链|
|DNA母链|提供DNA复制的模板|
|4种脱氧核苷酸|合成_______的原料|
|DNA聚合酶|催化合成DNA子链|
|引物|使DNA聚合酶能够从_______|
(3)PCR扩增的条件及过程。
①条件：一定缓冲液、DNA模板、分别与两条模板链相结合的2种_______、四种_______、_______的DNA聚合酶、以及能自动调控温度的设备。
②过程：目的基因DNA受热后解为单链，引物与单链相应互补序列结合；然后以单链DNA为模板，在DNA聚合酶作用下进行延伸，即将4种脱氧核苷酸加到引物的3'端，如此重复循环多次，每次的过程如下：

(4)仪器：利用PCR特异性快速扩增目的基因，可以在_______(PCR仪)中自动完成。
(5)鉴定：常采用_______来鉴定PCR的产物。

答案： 受体细胞性状@@预期表达产物@@编码蛋白质@@功能清晰@@序列数据库@@DNA半保留复制@@DNA双链@@DNA子链@@引物的3'端开始连接脱氧核苷酸@@引物@@脱氧核苷酸@@耐高温@@90@@50@@72@@耐高温的DNA聚合酶@@碱基互补配对@@PCR扩增仪@@琼脂糖凝胶电泳@@

三、基因表达载体的构建
1. 构建基因表达载体的目的。
(1)使目的基因在受体细胞中_______，并且可以_______给下一代。
(2)使目的基因能够_______和发挥作用。
2. 基因表达载体的组成。

答案： 稳定存在@@遗传@@表达@@上游@@RNA聚合酶@@mRNA@@激活或抑制@@目的基因@@下游@@转录@@标记基因

四、将目的基因导入受体细胞
1. 导入植物细胞。
(1)花粉管通道法。
用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入_______；可以在植物受粉后一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助_______进入胚囊。
(2)农杆菌转化法。
①转化：目的基因进入_______内，并且在受体细胞内_______和_______的过程。
②原理：农杆菌Ti质粒上的_______可整合到受体细胞的染色体DNA上。
③适用范围：主要适用于________和________。
2. 导入动物细胞。
(1)常用方法：________技术。
(2)受体细胞：________。
3. 导入原核生物细胞。
方法：先用________处理大肠杆菌细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后将重组的基因表达载体导入其中。

答案： 子房@@花粉管通道@@受体细胞@@维持稳定表达@@T - DNA@@双子叶植物@@裸子植物@@显微注射@@受精卵@@Ca²⁺@@

五、目的基因的检测与鉴定
1. 分子水平的检测。
(1)通过________检测转基因生物DNA上是否插入了目的基因，或是否转录出mRNA。
(2)用________杂交技术。检测目的基因是否翻译成蛋白质。
2. 个体水平鉴定：通过抗虫、抗病的________实验，以确定是否有抗性及抗性程度。

答案： PCR等技术@@抗原—抗体@@接种