《2025年赢在微点轻松课堂微讲小本高中生物选择性必修3》

微探究
1. 在切割含目的基因的DNA分子时，限制性内切核酸酶要切割几个磷酸二酯键？为什么？
2. 限制酶和DNA解旋酶的作用部位有什么不同？

答案： 提示：4个。DNA分子为双链，且目的基因两端均含有限制性内切核酸酶的识别位点。@@提示：限制酶作用于两个核苷酸之间的磷酸二酯键，DNA解旋酶作用于碱基对之间的氢键。

【典例1】 下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。
|限制酶|BamHⅠ|BclⅠ|Sau3AⅠ|HindⅢ|
|----|----|----|----|----|
|识别序列及切割位点|Gsup＞↓/sup＞GATC C
C CTAGsup＞↑/sup＞ G|Tsup＞↓/sup＞GATC A
A CTAGsup＞↑/sup＞ T|GATCsup＞↓/sup＞
sup＞↑/sup＞CTAG|Asup＞↓/sup＞AGCT T
T TCGAsup＞↑/sup＞|
请回答下列问题：

（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用_______两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过_______酶作用后获得重组质粒。
（2）若BamHⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为_______，对于该部位，这两种酶_______（填“都能”“都不能”或“只有一种能”）切开。
（3）若用Sau3AⅠ切图1质粒最多可能获得_______种大小不同的DNA片段。

答案： BclⅠ和HindⅢ@@DNA连接@@$\begin{pmatrix}T GATC C\\A CTAG G\end{pmatrix}$（或$\begin{pmatrix}G GATC A\\C CTAG T\end{pmatrix}$）@@不能@@7

【微变式】 下表所示为常用的限制酶及其识别序列和切割位点，由此推断以下说法，正确的是（）
|限制酶名称|识别序列和切割位点|限制酶名称|识别序列和切割位点|
|----|----|----|----|
|BamHⅠ|Gsup＞↓/sup＞GATC C|KpnⅠ|GGTACsup＞↓/sup＞C|
|EcoRⅠ|Gsup＞↓/sup＞AATTC|Sau3AⅠ|sup＞↓/sup＞GATC|
|HindⅡ|GTYsup＞↓/sup＞RAC|SmaⅠ|CCCsup＞↓/sup＞GGG|
注：Y＝C或T，R＝A或G。

A. 限制酶切割后不一定形成黏性末端
B. 限制酶的切割位点一定在识别序列的内部
C. 不同限制酶切割后一定形成不同的黏性末端
D. 一种限制酶一定只能识别一种核苷酸序列

答案： A