Question

【题目】为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行了如图A所示的实验。

（1）步骤③的培养基成分与普通液体培养基相比，最大的区别是步骤③培养基中_______。从功能上讲，步骤③中使用的培养基属于______________培养基。培养基的灭菌时间应该从____________________开始计时。

（2）同学甲进行步骤④的操作，其中．个平板经培养后的菌落分布如图B所示。该同学的接种方法是__________________，出现图B结果可能的失误操作是_____________。

（3）同学乙采用平板划线法纯化菌株，培养后的菌落分布如图C，平板中部分菌落越来越稀少，因为是__________________________。

（4）步骤⑤后取样测定石油含量的目的是_______________________________。

Answer 1

【答案】石油为唯一碳源 选择 达到设定的温度或压力值 稀释涂布平板法 涂布不均匀 划线过程接种环上的菌种逐渐减少 筛选出分解石油能力最好的细菌

【解析】

从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株。筛选菌株的过程要使用选择培养基，操作过程中要注意无菌操作，常用的固体培养基上接种方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法；微生物计数可用稀释涂布平板法和血球计数板计数法。

（1）为筛选出能分解石油的细菌，步骤③的培养基成分与普通液体培养基相比，最大的区别是步骤③培养基中所以石油是唯一碳源。从功能上讲，步骤③中使用的培养基属于选择培养基。低温常压不能达到灭菌的目的，故培养基的灭菌时间应该从达到设定的温度或压力值开始计时。
（2）接种细菌常用的方法有平板划线法和稀释涂布平板法，图B中该同学的接种方法为稀释涂布平板法，出现图B的结果可能是操作过程中涂布不均匀导致的。

（3）根据图示：同学乙采用的接种方法是平板划线法纯化菌株，培养后的菌落分布如图C，平板中部分菌落越来越稀少，因为是划线过程每次划线的菌种都来自上次划线的末端，随划线次数的增加接种环上的菌种逐渐减少，最后形成分散成单个菌，进而繁殖成菌落。

（4）步骤⑤后取样测定石油含量，进一步操作是为筛选出分解石油能力最好的细菌。