[题目]人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值.只能从人血浆中制备.图一是以基因工程技术获取重组 HSA 的两条途径.其中报告基因表达的产物能催化无色物质 K 呈现蓝色.图二为相关限制酶的识别序列和切割位点.以及 HAS 基因两侧的核苷酸序列.据图回答下列问题:(1)在构建基因表达载体时.我们常常用不同的限制酶去切割目的基因和运载体来获得不同的黏性末端.原因是 .依据图一和图二分析.在构建基因表题目和参考答案 ——青夏教育精英家教网—

【题目】人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值，只能从人血浆中制备。图一是以基因工程技术获取重组 HSA 的两条途径，其中报告基因表达的产物能催化无色物质 K 呈现蓝色。图二为相关限制酶的识别序列和切割位点，以及 HAS 基因两侧的核苷酸序列。据图回答下列问题：

（1）在构建基因表达载体时，我们常常用不同的限制酶去切割目的基因和运载体来获得不同的黏性末端，原因是_____。依据图一和图二分析，在构建基因表达载体时下列叙述错误的是____

A．应该使用酶 B 和酶 C 获取 HSA 基因

B．应该使用酶 A 和酶 B 切割 Ti 质粒

C．成功建构的重组质粒含 1 个酶 A 的识别位点

D．成功建构的重组质粒用酶 C 处理将得到 2 个 DNA 片段

（2）PCR 技术应用的原理是_____，在利用该技术获取目的基因的过程中，以从生物材料中提取的 DNA 作为模板，利用_________寻找 HSA 基因的位置并进行扩增。

（3）图一过程①中需将植物细胞与_______________________混合后共同培养，旨在让__________________整合到植物细胞染色体 DNA 上；除尽农杆菌后，还须转接到含_____的培养基上筛选出转化的植物细胞。

（4）图一③过程中将目的基因导入绵羊受体细胞，采用最多，也是最为有效的方法是_____。

（5）为检测 HSA 基因的表达情况，可提取受体细胞的_____，用抗血清白蛋白的抗体进行杂交实验。

【答案】防止目的基因和质粒自身环化和反向连接 C DNA（双链）复制引物农杆菌 T-DNA 无色物质K 显微注射技术蛋白质

【解析】

基因工程技术的基本步骤是：目的基因的获取；基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样；目的基因的检测与鉴定。

（1）在构建基因表达载体时，常用两种不同的限制酶切割目的基因和质粒，获得不同的黏性末端，以防止目的基因和质粒自身环化和反向连接（或使目的基因定向连接到载体上）；

A、由图中DNA序列和酶切位点序列可知应使用酶B和酶C切割获取HSA基因，A正确；
B、导入的目的基因时应在T-DNA上，因此Ti质粒应用酶A和酶B切割，因为酶A和酶B切出的黏性末不能互补配对，可以将目的基因连接进去，B正确；
C、据图一图二分析可知，成功建构的重组质粒上不再有酶A的识别位点，C错误；
D、成功构建的重组质粒用酶C处理能得到2个DNA片段，应是A-C，和C-A片段，D正确。
故选C。
（2）PCR技术应用的原理是DNA（双链）复制，在利用该技术获取目的基因的过程中，以从生物材料中提取的DNA作为模板，利用引物寻找HSA基因的位置并进行扩增。
（3）图一过程①中需将植物细胞与农杆菌混合后共同培养，利用农杆菌的侵染特性，让T-DNA整合到植物细胞染色体DNA上；除尽农杆菌后，为了筛选出转化的植物细胞，利用重组质粒上的报告基因表达的产物能催化无色物质K呈现蓝色的特性，进行筛选，故还须将植物细胞转接到含无色物质K的培养基上。
（4）图一③过程中将目的基因导入绵羊受体细胞，通常采用较多的方法是显微注射技术。
（5）为检测HSA基因的表达情况，可利用抗原抗-体杂交技术，具体做法是：提取受体细胞的蛋白质，用抗血清白蛋白的抗体做杂交实验。