《2025年新坐标同步练习高中生物选择性必修第三册人教版青海专版》

4. (2024·天津高二月考)下表为常用的限制酶及其识别序列和切割位点,由此推断,以下说法正确的是(A)

注：Y = C或T,R = G或A。
A.一种限制酶可能识别不止一种核苷酸序列
B.限制酶切割后一定形成黏性末端
C.不同的限制酶切割DNA分子形成的黏性末端一定不同
D.限制酶的切割位点都在识别序列内部

答案： 解析:选 A。HincⅡ的识别序列为—GTYRAC—,其中 Y=C 或 T,R=G 或 A,则其识别序列可能为—GTCGAC—、—GTTAAC—,由此可知,一种限制酶可能识别不止一种核苷酸序列,A正确;限制酶切割后可能形成黏性末端,也可能形成平末端,B错误;不同限制酶切割 DNA 分子后可能形成相同的黏性末端,C错误;限制酶的切割位点可能在识别序列内部,也可能在识别序列外部,如 Sau3AⅠ的切割位点,D错误。

5. DNA疫苗是指将编码保护性抗原蛋白的基因(如图甲)插入适宜的质粒(如图乙)中得到的重组DNA分子,将其导入人体内,其在人体细胞内表达的产物可直接诱导机体产生免疫反应。可选择的限制酶分别是BglⅡ、EcoRⅠ和Sau3AⅠ。下列分析错误的是(D)

A.构建DNA疫苗时,可用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因和质粒
B.若用EcoRⅠ切割质粒,产生的DNA片段具有黏性末端
C.用EcoRⅠ切割目的基因和质粒,再用DNA连接酶连接,会产生多种连接产物
D.图乙质粒用EcoRⅠ切割前后,分别含有2个和4个游离的磷酸基团

答案： 解析:选 D。分析题图可知,外源 DNA 分子和质粒上都含有3种限制酶(BglⅡ、EcoRⅠ和 Sau3AⅠ)的切割位点,为了防止目的基因和质粒自身环化以及两者之间的反向连接,构建 DNA 疫苗时,可用 BglⅡ和 Sau3AⅠ切割目的基因和质粒,A正确;用 EcoRⅠ切割后获得的是黏性末端,B正确;用 EcoRⅠ切割目的基因和质粒,再用 DNA 连接酶连接,能产生多种连接产物,如目的基因自身环化、质粒自身环化、目的基因与质粒正向连接、目的基因与质粒反向连接等,C正确;题图乙质粒用 EcoRⅠ切割前为环状 DNA 分子,不含游离的磷酸基团,切割后为链状 DNA 分子,含有2个游离的磷酸基团,D错误。

一、目的基因的筛选与获取(第一步)
1. 目的基因


2. 获取目的基因的方法
(1)利用 PCR 获取和扩增目的基因
- ①含义：在体外提供参与 DNA 复制的④各种组分与⑤反应条件,对目的基因的⑥核苷酸序列进行大量复制的技术。
- ②原理：⑦DNA的半保留复制。
- ③条件

- ④过程

- ⑤鉴定：常采用⑱琼脂糖凝胶电泳来鉴定 PCR 的产物。
(2)人工合成目的基因。
(3)通过构建基因文库获取目的基因。

答案： ①表达产物 ②编码蛋白质 ③目的基因 ④各种组分 ⑤反应条件 ⑥核苷酸序列 ⑦DNA的半保留复制 ⑧缓冲液 ⑨脱氧核苷酸 ⑩耐高温 ⑪3' ⑫90 ⑬解聚 ⑭50 ⑮两种引物 ⑯72 ⑰DNA聚合酶 ⑱琼脂糖凝胶电泳