《2025年新坐标同步练习高中生物选择性必修第三册人教版青海专版》

 三、DNA的粗提取与鉴定

答案： ㉘蛋白质 ㉙2 mol/L ㉚蓝色

(1)基因工程的原理是基因重组,此变异是定向的。(√)
(2)重组DNA技术所需要的工具酶有限制酶、DNA连接酶和载体。(×)
(3)DNA连接酶可以连接目的基因与载体的氢键,形成重组DNA。(×)
(4)DNA连接酶能将断开的氢键连接起来。(×)
(5)在基因工程操作中,真正被用作载体的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。(√)
(6)洋葱研磨液经纱布过滤后,应在-4℃冰箱中放置几分钟。(×)

答案：
(1)√
(2)× 工具酶为限制酶和 DNA 连接酶。
(3)× DNA 连接酶可以连接目的基因与载体的磷酸二酯键,形成重组 DNA。
(4)× DNA 连接酶能恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。
(5)√
(6)× 洋葱研磨液经纱布过滤后,应在$4^{\circ }C$冰箱中放置几分钟。

核心点一 基因工程的基本工具——工具酶
[探究1] 切割DNA分子的工具是限制性内切核酸酶,这类酶主要是从原核生物中分离纯化出来的,它能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。
(1)推断限制酶切割一次可断开几个磷酸二酯键？产生多少游离的磷酸基团？产生几个末端？
(2)黏性末端和平末端是如何形成的？限制酶的识别序列有什么特点？
(3)写出下列限制酶切割形成的黏性末端。同种限制酶切割产生的黏性末端是否相同？不同限制酶切割产生的黏性末端是否一定不同？

(4)图中的BamHⅠ和BglⅡ切割产生的两个黏性末端相互连接后,______(填“能”或“不能”)再被所用的限制酶识别。
(1)可断开2个磷酸二酯键;产生2个游离的磷酸基团;产生2个末端(2个黏性末端或2个平末端)。
(2)限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将 DNA 两条链分别切开,形成黏性末端,而从识别序列的中心轴线处切开就产生平末端。识别序列的特点是呈现碱基互补对称,无论是几个核苷酸组成,都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链 DNA 上的碱基是反向对称重复排列的。
(3)如图 BamHⅠ：$\begin{array}{r} 5'-G\\ 3'-CCTAG,\end{array} $EcoRⅠ：$\begin{array}{r} 5'-G\\ 3'-CTTAA,\end{array} $Hind Ⅲ：$\begin{array}{r} 5'-A\\ 3'-TTCGA,\end{array} $BglⅡ：$\begin{array}{r} 5'-A\\ 3'-TCTAG。\end{array} $同种限制酶切割产生的黏性末端相同。不同的限制酶切割产生的黏性末端可能相同。
(4)不能

答案： [探究1]
(1)可断开2个磷酸二酯键;产生2个游离的磷酸基团;产生2个末端(2个黏性末端或2个平末端)。
(2)限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将 DNA 两条链分别切开,形成黏性末端,而从识别序列的中心轴线处切开就产生平末端。识别序列的特点是呈现碱基互补对称,无论是几个核苷酸组成,都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链 DNA 上的碱基是反向对称重复排列的。
(3)如图 BamHⅠ：$\begin{array}{r} 5'-G\\ 3'-CCTAG,\end{array} $EcoRⅠ：$\begin{array}{r} 5'-G\\ 3'-CTTAA,\end{array} $Hind Ⅲ：$\begin{array}{r} 5'-A\\ 3'-TTCGA,\end{array} $BglⅡ：$\begin{array}{r} 5'-A\\ 3'-TCTAG。\end{array} $同种限制酶切割产生的黏性末端相同。不同的限制酶切割产生的黏性末端可能相同。
(4)不能

[探究2] 回答下列与DNA连接酶有关的问题：
将切下来的DNA片段拼接成新的DNA分子是靠DNA连接酶完成的,因此DNA连接酶是基因工程的“分子缝合针”。
(1)DNA连接酶和限制酶的作用部位是否相同？
(2)DNA连接酶和DNA聚合酶有什么不同？

答案： [探究2]
(1)相同。
(2)DNA聚合酶是在 DNA 复制过程中,催化单个脱氧核苷酸添加到已有脱氧核苷酸片段上,形成与模板链互补的 DNA 链,从而形成新的双链 DNA 分子;DNA 连接酶是将具有互补黏性末端或平末端的 DNA 片段连接起来,形成重组 DNA 分子。